透析
透析膜
透析膜の準備
購入したばかりの透析膜には、張り付き防止のための粉などが付着しています。これを洗浄し、冷蔵庫に保存しておきます。
- きれいな手袋を装着し、適切な長さ(1 m程度)に切る
- 15min. 水につけておく
- 10mM 炭酸水素ナトリウム(sodium bicarbonate)で、30-60 min、80度
- 10mM Na2EDTAで、30-60 min.、80度
- MilliQ水、30-6 0min.、80度
- 0.05% NaN3 保存(常に濡れている状態を保つこと)
透析膜の利用
- 保存液から取りだし、MilliQ水でそのまま洗浄
- 一方をクランプで止めるかか括り、内部を洗浄すると共に漏れが無いことを確認
- 試料を入れる
- もう一方を止めるか、括り、漏れが無いことを確認
- 100−1000倍のバッファーで透析を行うこと。
- 透析時間は、3時間(低分子量の塩であれば十分)以上。粘度が高いものは時間が掛かる。アクチンの場合は、一晩以上がお薦め。
- できれば、透析溶液を変えたほうがよい。2回程度、早い時期に替えるのがよい。