単粒子解析
単粒子解析法とは、Single Particle Analysis(SPA)の日本語訳である。単粒子とは、画像中の粒子(対象)が元来、2次元的にもしくは3次元的に同じ形をしていることを仮定して、その2次元、3次元構造解析を行う画像処理法のひとつである。
2次元単粒子解析
2次元単粒子解析とは、2次元で得られている電子顕微鏡投影像を分類し、それぞれを平均し、構造の違いを論じるための解析方法を指します。
3次元単粒子解析
元々の粒子の構造が3次元的に単一であることを仮定して、2次元の粒子画像群から3次元構造を再構成する画像処理法を指します。その手順は、下記のようになります。
ROI(粒子画像の抽出)
電子顕微鏡画像の前処理
以下の流れでCTF補正を行います。
電子顕微鏡画像(2D) ↓ A: mrcImageFFT 電子顕微鏡画像(2DFFT) ↓ B: ctfDisplay 電子顕微鏡画像(2DFFT) + CTF情報(ASCII) ↓ C: mrcImageCTFCompensation CTF補正済み画像(2D)
最小 最大 |
-1066.31 (69, 47, 0) 489.111 (58, 48, 0) |
|
最小 最大 |
0.129048 (255, 128, 0) 772.6 (142, 252, 0) |
実行直後 |
> | lmax=400でトーンリングが見える |
> | Rmax=0.08で拡大表示する |
> | 谷に線を合わせる(Defoucus=27000) |
最後にInfoのSaveボタンでCTF情報ファイルを保存します。(保存した出力データ)
最小 最大 |
-461.072 (75, 56, 0) 1206.48 (16, 58, 0) |
電子顕微鏡画像から粒子画像の抽出
最小 最大 |
-461.072 (75, 56, 0) 1206.48 (16, 58, 0) |
実行直後 |
> | mrcImage InfoのMax, Minの値を、 |
> | 切り出したい範囲を囲む |
複数囲む場合はROI->MultiROIにチェック |
最小 最大 |
-461.072 (17, 21, 0) 1098.8 (10, 13, 0) |
最小 最大 |
-394.013 (18, 10, 0) 1206.48 (14, 12, 0) |
最小 最大 |
-418.302 (17, 6, 0) 1107.53 (14, 10, 0) |
参照画像の作成
参照画像の準備(mrcImageModelCreate, pdb2mrc etc.)
3次元の概形が分かっている場合
重心 最大半径 |
3.012034e-03 -4.102425e-03 7.530045e-04 3.286664e+01 |
### ### Initial model from PDB ### REFSOURCE=121p-shift DELTA=2.5 SIZE_X=64 SIZE_Y=64 SIZE_Z=64 START_X=`awk 'BEGIN { print -1*$(DELTA)*$(SIZE_X)/2}'` START_Y=`awk 'BEGIN { print -1*$(DELTA)*$(SIZE_Y)/2}'` START_Z=`awk 'BEGIN { print -1*$(DELTA)*$(SIZE_Z)/2}'`
最小 最大 |
0 (0, 0, 0) 22320.6 (34, 39, 32) |
3次元の概形が分からない場合
最小 最大 |
0 (0, 0, 0) 2 (10, 10, 1) |
3次元再構成
ROIファイル(.roi)および参照画像(.ref3d)がある場合はこちらのMakefileにて、make Allと入力すれば、3次元再構成を1ターン分行い、3次元再構成されたファイル(.3d)が作成されます。
参照画像から2次元の参照投影像のセットを生成
最小 最大 |
0 (0, 0, 0) 22320.6 (34, 39, 32) |
今回はファイル名のみ変更しています。
# Ref File Name INITIAL=121p-shift # # Search Area for 3D # ROTMODE=YOYS # # Search Area for 3D # ROTMODE=YOYS # Rot1 ROT1MIN=0 ROT1MAX=359 ROT1D=30 nRot1=6 # Rot2 ROT2MIN=0 ROT2MAX=359 ROT2D=30 nRot2=6 # Rot3 ROT3MIN=0 ROT3MAX=0 ROT3D=30 nRot3=1
サイズ 最小 |
( 64, 64, 169) -76.7146 (32, 41, 138) |
粒子画像の再調整
最小 最大 |
-461.072 (17, 21, 0) 1098.8 (10, 13, 0) |
最小 最大 |
-461.072 (17, 21, 0) 1098.8 (10, 13, 0) |
最小 最大 |
-461.072 (17, 21, 0) 1098.8 (10, 13, 0) |
最小 最大 |
-510.77 (39, 40, 0) 1049.1 (32, 32, 0) |
# Pad size for 2D PAD_W=64 PAD_H=64
最も類似度(相関値)の高い参照投影像の角度を粒子画像の投影角として決定
最小 最大 |
-510.77 (39, 40, 0) 1049.1 (32, 32, 0) |
サイズ 最小 |
( 64, 64, 169) -76.7146 (32, 41, 138) |
# For 2D STEP=12 ROTMIN=0 ROTMAX=359 nROT=`echo "" | awk 'BEGIN {printf 360 / $(STEP)}'`
0: YOYS 0.000000 0.000000 0.000000 : 1737.870605 theta 179.499994 at 2.000000 1.000000 onMap 0.000000 0.000000 Input-121p-shiftr.2d-0000.pad Cor 0.689801 1: YOYS 0.000000 30.000001 0.000000 : 1731.543091 theta 284.208488 at 1.000000 1.000000 onMap 0.000000 0.083333 Input-121p-shiftr.2d-0000.pad Cor 0.695427 2: YOYS 0.000000 60.000002 0.000000 : 3307.848633 theta 281.216811 at 1.000000 1.000000 onMap 0.000000 0.166667 Input-121p-shiftr.2d-0000.pad Cor 0.797129 3: YOYS 0.000000 90.000003 0.000000 : 1742.967407 theta 26.925002 at 0.000000 1.000000 onMap 0.000000 0.250000 Input-121p-shiftr.2d-0000.pad Cor 0.711250 4: YOYS 0.000000 120.000003 0.000000 : 1774.003418 theta 29.916669 at 0.000000 1.000000 onMap 0.000000 0.333333 Input-121p-shiftr.2d-0000.pad Cor 0.706876 -中略- 164: YOYS 360.000010 240.000007 0.000000 : 1713.460815 theta 89.749970 at 1.000000 63.000000 onMap 0.000000 0.666667 Input-121p-shiftr.2d-0000.pad Cor 0.691559 165: YOYS 360.000010 270.000001 0.000000 : 1856.687744 theta 239.333326 at 0.000000 1.000000 onMap 0.000000 0.750000 Input-121p-shiftr.2d-0000.pad Cor 0.723829 166: YOYS 360.000010 299.999995 0.000000 : 1759.510742 theta 236.341675 at 0.000000 1.000000 onMap 0.000000 0.833333 Input-121p-shiftr.2d-0000.pad Cor 0.720541 167: YOYS 360.000010 329.999989 0.000000 : 1599.635254 theta 299.166657 at 63.000000 0.000000 onMap 0.000000 0.916667 Input-121p-shiftr.2d-0000.pad Cor 0.689916 168: YOYS 360.000010 360.000010 0.000000 : 1737.870850 theta 179.499994 at 2.000000 1.000000 onMap 0.000000 1.000000 Input-121p-shiftr.2d-0000.pad Cor 0.689801
最小 最大 |
-447.493 (25, 39, 0) 1062.05 (35, 31, 0) |
Input-121p-shiftr.2d-0000.fit YOYS 360.000010 60.000002 0.000000 3307.848633
121p-shift-noise-0-0-0.fit YOYS 0.000000 360.000010 0.000000 2782847.500000 121p-shift-noise-0-180-0.fit YOYS 149.999997 30.000001 0.000000 2797722.500000 121p-shift-noise-0-120-0.fit YOYS 0.000000 120.000003 0.000000 2761359.500000 121p-shift-noise-0-300-0.fit YOYS 0.000000 299.999995 0.000000 2657562.500000 121p-shift-noise-0-60-0.fit YOYS 0.000000 60.000002 0.000000 2622117.250000 -中略- 121p-shift-noise-60-120-0.fit YOYS 60.000002 120.000003 0.000000 2723655.000000 121p-shift-noise-60-240-0.fit YOYS 60.000002 240.000007 0.000000 2573666.750000 121p-shift-noise-60-300-0.fit YOYS 60.000002 299.999995 0.000000 2794947.500000 121p-shift-noise-60-60-0.fit YOYS 60.000002 60.000002 0.000000 2802267.000000
3次元像を再構成する
121p-shift-noise-0-0-0.fit YOYS 0.000000 360.000010 0.000000 2782847.500000 121p-shift-noise-0-180-0.fit YOYS 149.999997 30.000001 0.000000 2797722.500000 121p-shift-noise-0-120-0.fit YOYS 0.000000 120.000003 0.000000 2761359.500000 121p-shift-noise-0-300-0.fit YOYS 0.000000 299.999995 0.000000 2657562.500000 121p-shift-noise-0-60-0.fit YOYS 0.000000 60.000002 0.000000 2622117.250000 -中略- 121p-shift-noise-60-120-0.fit YOYS 60.000002 120.000003 0.000000 2723655.000000 121p-shift-noise-60-240-0.fit YOYS 60.000002 240.000007 0.000000 2573666.750000 121p-shift-noise-60-300-0.fit YOYS 60.000002 299.999995 0.000000 2794947.500000 121p-shift-noise-60-60-0.fit YOYS 60.000002 60.000002 0.000000 2802267.000000
最小 最大 |
-6849.61 (11, 31, 32) 9844.57 (33, 28, 30) |
3次元像の分解能・質の確認
繰り返し(精密化)